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RNA的完整性質(zhì)控
來源: | 作者:201321492800086 | 發(fā)布時(shí)間: 2371天前 | 1842 次瀏覽 | 分享到:
RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中,轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(Transfer RNA,tRNA)是攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合,而后核糖體RNA(Ribosomal RNA,rRNA)將各個(gè)氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。其分類可分為四類:mRNA、rRNA、tRNA、miRNA、小分子RNA。

RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中,轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(Transfer RNA,tRNA)是攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合,而后核糖體RNA(Ribosomal RNA,rRNA)將各個(gè)氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。其分類可分為四類:mRNA、rRNA、tRNA、miRNA、小分子RNA。


無論是做植物研究還是動(dòng)物研究,無論是容易抽提的組織還是難抽提的組織,抽提好Total RNA,小RNA,外泌體RNA等核酸后,質(zhì)控是關(guān)鍵。特別是容易降解的Total RNA,全自動(dòng)核酸質(zhì)控儀可降低環(huán)境RNA消解酶對(duì)樣本的影響,可提供直觀的量化RNA Quality Number值作為評(píng)斷參考(圖1),還有濃度低的小RNA(圖2),跑普通電泳是完全不可行的,可以用Qsep100全自動(dòng)核酸蛋白分析系統(tǒng)或者其他同類產(chǎn)品進(jìn)行檢測,樣本消耗只需1μL,檢測結(jié)果清晰明了。


圖1 Total RNA質(zhì)控

圖2 小 RNA質(zhì)控

目前,各地醫(yī)院在積極構(gòu)建生物樣本庫,利用生物樣本開展細(xì)胞、分子、基因、蛋白質(zhì)層面的研究,可以展開疾病診斷、個(gè)性化治療的研究。在新藥開發(fā)中,可以應(yīng)用大規(guī)模生物樣本進(jìn)行藥物敏感性和特異性的研究。在藥物治療方面,可以基于生物樣本進(jìn)行藥物相關(guān)研究,包括藥物與基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)等,為指導(dǎo)個(gè)性化用藥提供參考。生物樣本庫會(huì)收集正常人和病人的尿液、糞便、血液和病理組織進(jìn)行低溫凍存或者粗提DNA和RNA后凍存,以備后期研究需要,當(dāng)同類型樣本累計(jì)到一定數(shù)量之后就可以對(duì)同類病例進(jìn)行遺傳分析,從遺傳學(xué)層面發(fā)現(xiàn)病因,以期尋找更加先進(jìn)的治療方式,是非常具有價(jià)值的樣本積累過程。


全自動(dòng)儀器可檢測樣本儲(chǔ)存后的情況,反應(yīng)樣本狀態(tài),為下游實(shí)驗(yàn)提供方案選擇和調(diào)整的參考。現(xiàn)在NGS火爆流行,建庫成功的前提就在于樣本核酸的完整性程度來選擇合適的建庫試劑盒和建庫方式。圖3是對(duì)RNA不同完整性樣本的檢測(原圖可參考文獻(xiàn):A Nucleic Acid Quality Control Strategy for Frozen Tissues from a Biobank of High-Risk Pregnancy)。



圖3 不同完整性質(zhì)量的Total RNA