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濃度測(cè)定新選擇，助力核酸定量
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作者:201321492800086
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發(fā)布時(shí)間: 2365天前
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在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，核酸定量是必備的一個(gè)過(guò)程，包括初提產(chǎn)物的核酸（gDNA和Total RNA）質(zhì)控，或者PCR產(chǎn)品和NGS文庫(kù)質(zhì)控。目前常見(jiàn)的定量?jī)x器是Nanodrop和Qubit，前者只需一兩微升的樣品，不需額外試劑，就可以利用核酸的紫外吸收特性，得到樣本濃度值，但當(dāng)樣本為DNA，卻混有RNA時(shí)定量數(shù)據(jù)會(huì)出現(xiàn)較大偏差；而后者Qubit采用特異熒光染料法，可以特異地與不同種類的核酸鏈相結(jié)合，并在特定波長(zhǎng)光源的激發(fā)下，發(fā)出熒光。Qubit定量可以更加準(zhǔn)確，但是需要配套試劑，價(jià)格也比較高。
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，核酸定量是必備的一個(gè)過(guò)程，包括初提產(chǎn)物的核酸（gDNA和Total RNA）質(zhì)控，或者PCR產(chǎn)品和NGS文庫(kù)質(zhì)控。目前常見(jiàn)的定量?jī)x器是Nanodrop和Qubit，前者只需一兩微升的樣品，不需額外試劑，就可以利用核酸的紫外吸收特性，得到樣本濃度值，但當(dāng)樣本為DNA，卻混有RNA時(shí)定量數(shù)據(jù)會(huì)出現(xiàn)較大偏差；而后者Qubit采用特異熒光染料法，可以特異地與不同種類的核酸鏈相結(jié)合，并在特定波長(zhǎng)光源的激發(fā)下，發(fā)出熒光。Qubit定量可以更加準(zhǔn)確，但是需要配套試劑，價(jià)格也比較高。
Qsep100全自動(dòng)核酸蛋白分析系統(tǒng)，在原來(lái)檢測(cè)核酸片段長(zhǎng)度的功能上增加了濃度定量功能，可以一步解決定性和定量?jī)蓚€(gè)步驟，特別適合NGS平臺(tái)的文庫(kù)質(zhì)控流程。
例1：現(xiàn)對(duì)一個(gè)原濃度樣本為6.5ng/ul（Qubit）的文庫(kù)樣本進(jìn)行定量分析，以2倍梯度，稀釋5個(gè)梯度，如下：
表中數(shù)據(jù)顯示，S2卡夾檢測(cè)同一個(gè)樣本的五個(gè)不同濃度，所得Avg.size基本一致，最大值和最小值偏差為2.7%；
以各管稀釋倍數(shù)的倒數(shù)為橫坐標(biāo) ，各管檢測(cè)所得的濃度為縱坐標(biāo)，得到圖中的一次函數(shù)方程，擬合度R2=0.9989；所測(cè)得濃度線性關(guān)系良好。
例2：穩(wěn)定性測(cè)試，對(duì)同一個(gè)樣本分3管做獨(dú)立檢測(cè)如下：
表中數(shù)據(jù)顯示，3管樣本檢測(cè)所得Avg.size基本一致，濃度最大值和最小值偏差為1.7%，表明S2卡夾檢測(cè)同一個(gè)樣本，3次重復(fù)測(cè)得的片段分布及濃度定量重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定 。
