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多重 PCR 在病原微生物分子分型中的應(yīng)用
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作者:201321492800086
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發(fā)布時(shí)間: 2538天前
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多重 PCR，又稱多重引物 PCR 或復(fù)合 PCR，是指在同一 PCR 反應(yīng)體系里加上二對(duì)以上引物，同時(shí)擴(kuò)增出多個(gè)核酸片段的 PCR 反應(yīng)。多重 PCR 技術(shù)主要應(yīng)用于直接檢測(cè)簡(jiǎn)單處理過的臨床標(biāo)本, 以達(dá)到快速檢測(cè)的目的。其在基因敲除分析、突變和多態(tài)性分析、定量分析等方面都顯示出了廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
多重 PCR，又稱多重引物 PCR 或復(fù)合 PCR，是指在同一 PCR 反應(yīng)體系里加上二對(duì)以上引物，同時(shí)擴(kuò)增出多個(gè)核酸片段的 PCR 反應(yīng)。多重 PCR 技術(shù)主要應(yīng)用于直接檢測(cè)簡(jiǎn)單處理過的臨床標(biāo)本, 以達(dá)到快速檢測(cè)的目的。其在基因敲除分析、突變和多態(tài)性分析、定量分析等方面都顯示出了廣泛的應(yīng)用價(jià)值。本文主要介紹多重 PCR 技術(shù)在病原微生物檢測(cè)方面的突出貢獻(xiàn)。
主要特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)：
- 操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)周期短
- 靈敏度高，特異性強(qiáng)
- 檢測(cè)過程系統(tǒng)，全面
- 檢測(cè)成本低
多重 PCR 目前主要應(yīng)用于病原微生物檢測(cè)的兩個(gè)方面：
- 檢測(cè)同一樣本中是否有多重病原微生物的出現(xiàn)，一般會(huì)選擇病原的毒力因子、特異性基因或核糖體 RNA 作為靶基因進(jìn)行鑒定；
- 對(duì)某一病原的多個(gè)基因進(jìn)行檢測(cè)以減少假陽(yáng)性。比如肝炎病毒，腸道致病性細(xì)菌，性傳播疾病，呼吸道致病菌，戰(zhàn)傷細(xì)菌及生物戰(zhàn)劑細(xì)菌的檢測(cè)，都可以使用多重 PCR 的方法。
多重 PCR 過程結(jié)束后，大部分研究者會(huì)使用水平凝膠電泳進(jìn)行鑒定。普通水平凝膠電泳分辨率差，在 PCR 產(chǎn)物較多時(shí)不能很好的區(qū)分開所有條帶，靈敏度低，且當(dāng)片段濃度較低時(shí)，水平凝膠電泳不能很好的將結(jié)果展現(xiàn)出來。水平凝膠電泳的另一大缺陷就是，在結(jié)果分析中主觀臆斷性較大，在臨床檢測(cè)或科研過程中缺乏科學(xué)應(yīng)用的嚴(yán)謹(jǐn)性和準(zhǔn)確性，所以高分辨率高靈敏度的全自動(dòng)毛細(xì)管電泳系統(tǒng)又因其自動(dòng)化標(biāo)準(zhǔn)化的特點(diǎn)開始逐步取代水平凝膠電泳。
全自動(dòng)毛細(xì)管電泳系統(tǒng)具有高分辨率、高靈敏度的特點(diǎn)，市面上目前應(yīng)用廣泛的 Qsep 系列全自動(dòng)核酸蛋白分析系統(tǒng)就是典型的代表。Qsep 系列產(chǎn)品在 500bp 以內(nèi)可以達(dá)到 1-4bp 的分辨率，濃度檢測(cè)下限可達(dá)到 5pg。靈活的通量允許任意數(shù)量（1-96）樣本全自動(dòng)上樣，在得到美觀、精確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果之余，也不會(huì)浪費(fèi)您的試劑和耗材，極大的節(jié)約了實(shí)驗(yàn)室經(jīng)費(fèi)，解放了實(shí)驗(yàn)室勞動(dòng)力。目前 Qsep 系列有 Qsep1、Qsep100、Qsep400、Qsep100 Advance 四種型號(hào)，適用于不同樣本量的客戶。
多重PCR檢測(cè)結(jié)果
